L’immunofluorescence
Cours d'Immunofluorescence de parasitologie assuré par madame Bouchene
L’immunofluorescence (IF) est de loin la réaction sérologique la plus utilisée en parasitologie car applicable à la plupart des maladies parasitaires.
L’IF permet :
Soit d’identifier un antigène (parasite) à l’aide d’un immun sérum connu, c’est l’immunofluorescence directe (IFD)
Soit de rechercher et de titrer un anticorps à l’aide d’un antigène connu, c’est l’immunofluorescence indirecte (IFI)
I – L’ immunofluorescence directe :
L’IF directe est utilisée pour rechercher et identifier plus aisément et plus rapidement un parasite dans un prélèvement biologique, un frottis ou une coupe de tissu.
Principe :
Elle consiste simplement à appliquer sur une lame à examiner un anticorps fluorescent spécifique (généralement un anticorps monoclonal) qui va se fixer à l’antigène recherché, observé au microscope à UV, le parasite sera fluorescent, est facilement repérable.
Principales applications :
En parasitologie, la plupart des protozoaires peuvent être recherchés et identifiés avec l’IFD, nous insisterons sur les principales indications.
Amibiase : la recherche et mise en évidence d’E. histolytica dans différents liquides biologiques est facilité par cette technique.
Toxoplasmose : recherche du tachyzoïte dans plusieurs prélèvements : liquide amniotique, placenta, LCR, LBA.
Cryptosporidiose :
L’immunofluorescence directe permet sur un échantillon de selles fixées par le formol ou sur le culot d’une technique de concentration de porter un diagnostic avec une sensibilité et spécificité bien supérieure à celles des techniques de coloration classiques (Ziehl Neelsen) l’IF directe est d’un grand intérêt dans les pauci infestations.
En mycologie, pour les mycoses profondes, l’IF directe peut être utilisée pour l’identification de champignons pathogènes dans les tissus sur coupes histologiques, mais la principale indication est le diagnostic de la pneumocystose.
Pneumocystose :
L’IF directe permet sur tous les prélèvements, LBA surtout, une lecture rapide et aisée, elle utilise les anticorps monoclonaux anti-P. carinii dirigés spécifiquement contre les kystes et les formes végétatives (spores)
Méthode supérieure aux techniques de coloration car spécifique grâce à l’emploi d’anticorps monoclonal : Mono – fluokit Pneumocystis.
II – L’ immunofluorescence indirecte :
Principe :
L’IFI consiste à mettre en présence un antigène figuré connu et le sérum à tester puis à révéler dans un 2ème temps les anticorps fixés sur cet antigène par un sérum anti-globulines marqué à la fluorescéine.
Elle permet donc la mise en évidence d’anticorps spécifiques dans un sérum.
La réaction se déroule en 2 temps :
1e) Formation du complexe Ag – Ac :
- On met en contact l’Ag avec le sérum à tester.
- L’anticorps spécifique recherché se fixe sur l’antigène.
2e) Mise en évidence du complexe Ag – Ac par le conjugué fluorescent :
- On fait agir un sérum anti-globulines fluorescent.
- Le complexe Ag – Ac devient fluorescent dans une réaction positive.
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اللهم أمين
Mrc
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