Pharmacours: parasitologie

L’immunofluorescence

Cours d'Immunofluorescence de parasitologie assuré par madame Bouchene

L’immunofluorescence (IF) est de loin la réaction sérologique la plus utilisée en parasitologie car applicable à la plupart des maladies parasitaires.
L’IF permet :
Soit d’identifier un antigène (parasite) à l’aide d’un immun sérum connu, c’est l’immunofluorescence directe (IFD)
Soit de rechercher et de titrer un anticorps à l’aide d’un antigène connu, c’est l’immunofluorescence indirecte (IFI)
I – L’ immunofluorescence directe :
L’IF directe est utilisée pour rechercher et identifier plus aisément et plus rapidement un parasite dans un prélèvement biologique, un frottis ou une coupe de tissu.
Principe :
Elle consiste simplement à appliquer sur une lame à examiner un anticorps fluorescent spécifique (généralement un anticorps monoclonal) qui va se fixer à l’antigène recherché, observé au microscope à UV, le parasite sera fluorescent, est facilement repérable.
Principales applications :
En parasitologie, la plupart des protozoaires peuvent être recherchés et identifiés avec l’IFD, nous insisterons sur les principales indications.
Amibiase : la recherche et mise en évidence d’E. histolytica dans différents liquides biologiques est facilité par cette technique.
Toxoplasmose : recherche du tachyzoïte dans plusieurs prélèvements : liquide amniotique, placenta, LCR, LBA.
Cryptosporidiose :
L’immunofluorescence directe permet sur un échantillon de selles fixées par le formol ou sur le culot d’une technique de concentration de porter un diagnostic avec une sensibilité et spécificité bien supérieure à celles des techniques de coloration classiques (Ziehl Neelsen) l’IF directe est d’un grand intérêt dans les pauci infestations.
En mycologie, pour les mycoses profondes, l’IF directe peut être utilisée pour l’identification de champignons pathogènes dans les tissus sur coupes histologiques, mais la principale indication est le diagnostic de la pneumocystose.
Pneumocystose :
L’IF directe permet sur tous les prélèvements, LBA surtout, une lecture rapide et aisée, elle utilise les anticorps monoclonaux anti-P. carinii dirigés spécifiquement contre les kystes et les formes végétatives (spores)
Méthode supérieure aux techniques de coloration car spécifique grâce à l’emploi d’anticorps monoclonal : Mono – fluokit Pneumocystis.
II – L’ immunofluorescence indirecte :
Principe :
L’IFI consiste à mettre en présence un antigène figuré connu et le sérum à tester puis à révéler dans un 2ème temps les anticorps fixés sur cet antigène par un sérum anti-globulines marqué à la fluorescéine.
Elle permet donc la mise en évidence d’anticorps spécifiques dans un sérum.
La réaction se déroule en 2 temps :
1e) Formation du complexe Ag – Ac :
- On met en contact l’Ag avec le sérum à tester.
- L’anticorps spécifique recherché se fixe sur l’antigène.
2e) Mise en évidence du complexe Ag – Ac par le conjugué fluorescent :
- On fait agir un sérum anti-globulines fluorescent.
- Le complexe Ag – Ac devient fluorescent dans une réaction positive.

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Questions réponses en Parasitologie classées par cours – SEMESTRE 2 –

MYCOLOGIE

I. Introduction à la mycologie :

· Définition d’un champignon, classification sommaire et exemple

Ce sont des organismes nucléés de type eucaryotes (par opposition aux bactéries qui sont des procaryotes) qui sont dépourvus d’un pigment assimilateur : la chlorophylle et de ce fait ne peuvent pas réaliser la photosynthèse : ils sont donc HETEROTROPHES. Ils sont condamnés à mener une vie soit saprophytique soit parasitaire.

Classification sommaire : Le règne des champignons est divisé en 5 :

Ascomycotina :

- Ascomycètes : EX : les Dermatophytes et les Aspergillus.

- Hémi-Ascomycète

Zygomycotina : classe des zygomycètes, EX : champignons de la classe des mucorales
Basidiomycètes : EX : Cryptococcus neoformans
Deuteromycotina : classes :

hyphomycètes ; coelomycètes ; deuteromycètes .

Ex : champignons filamenteux : Les genres : Alternaria, Phoma, Candida etCryptococcus et Malassezia

Mastigomycotina : les classes oomycètes, et chrytidiales.

· Champignon dimorphique : définition + exemples

Un champignon possédant 2 morphologies selon : l’état où il se trouve et la température. Il peut être à l’état :

Filamenteux : à l’état saprophyte dans le ½ extérieur, et dans le ½ de culture à 25 C°.

Levuriforme : à l’état parasitaire dans les tissus infectés, et dans le ½ de culture adapté à 37C°.

EX 1 : Sporothrix schenckii

EX2 : Histoplasma capsulatum var capsulatum

· Qu’est ce qu’un champignon parfait ?

Un champignon parfait est un champignon présentant les deux formes de reproductions (sexuée et asexuée)

Champignon imparfait : champignons à reproduction asexué uniquement « fungi imperfecti »

· Définition d’une levure : Ce sont des champignons dont la taille est réduite à une seule cellule ronde ou ovalaire (unicellulaire), à paroi mince ou épaisse, se multiplient par bourgeonnement ex : Candida, Cryptococcus

II. Candida et candidoses :

· Candidoses : définition, citez les différentes candidoses muqueuses

Ø Définition :

Mycoses cosmopolites dues au dévloppement dans les tissus de levures du genre Candida. On distingue :

- Candidoses superficielles : plus fréquentes et bénignes

- Candidoses profondes : (septicémie) rares mais très graves

Différentes candidoses muqueuses :

ü Candidoses buccales et péribuccales :

- Le muguet

- La perlèche candidosique

- La langue noire villeuse

ü La vulvo-vaginite candidosique

ü La balanite candidosique

ü Anite et périanite candidosique

· Facteurs favorisant la candidose :

Responsables du passage de: l’état saprophytique → l’état pathogène.

a) Facteurs locaux:

b) Facteurs généraux

L’humidité et la macération :

- Ménagères, plongeurs..

- Occlusion trop rigoureuse par les vêtements (couches, chaussures)

- Hygiène défectueuse …

- Localisation → plis

Les modifications du pH cutanés:

- Usage d’un savon acide

- Solution antiseptique sur la peau ou muqueuse (vagin)

Contact avec un milieu riche en sucre (pâtissiers...)

L’antibiothérapie générale:

Diminution de la flore bactérienne sur la peau ou le tube digestif à augmentation nombre de candida.

Physiologiques :

- Enfants + sujets âgés = mycoses buccales +++

- Grossesse → candidoses vaginales (par modification physiologique locale)

- Ménopause

Pathologiques:

- Le diabète → Grands plis, Muqueuses ano- génitales …

- Hypo et hyperthyroïdie, SIDA, tuberculose…

- Maladies malignes: cancer, leucémie, lymphome…

Iatrogènes :

- ATB, cytotoxiques, corticostéroïdes, antimitotiques, chimiothérapie…

- Agressions chirurgicales : Transplantation d’organe (rénale), chirurgie digestive, CVx, pose de cathéter, prothèses, sondes…

· Qu’est ce qu’un auxanogramme et un zymogramme ? Dans quel cas les utilise-t-on ?

Auxanogramme : c’est l’étude de l’assimilation des sucres

Zymogramme : c’est l’étude de la fermentation des sucres

Utilisation : identification des autres espèces de Candida

· Qu’est ce que la perlèche ? Quel est l’agent pathogène ? Quels sont les individus les plus touchés ?

Perlèche : Est un intertrigo érythémato - fissuraire et croûteux des commissures labiales

Agent pathogène : Candida albicans

Individus les plus touchés : nouveau né, sujets âgés et porteurs de prothèse dentaire

· Définition du muguet + agent pathogène

Ce sont des taches blanchatres sur une base érythémateuse et qui siègent au niveau de la langue, la face interne de la joue, le palais, les gencives. Il est souvent associé à la perlèche.

Agent pathogène : Candida albicans

· Qu’est ce qu’un onyxis et un perionyxis ?

Atteinte surtout des ongles de la main (rarement les pieds) favorisée par l’humidité (travaux ménagers, plongeurs), le sucre (pâtissiers) et les microtraumatismes

Périonyxis : d’évolution subaigüe, bourrelet rouge douloureux et inflammatoire

Onyxis : secondaire au périonyxis, débute par une coloration brun-verdâtre du bord proximal ou des bords latéraux de l’ongle

· Citez deux modes de contamination par Candida albicans

Contamination endogène : tube digestif, vagin, voies urinaires

Contamination exogène : air, matériel souillé (cathéter, sondes…)

· Citez deux milieux d’indentification des candidoses

PCB, Rice cream.

· Citez deux manifestations cutanées à candidose

Intertrigo, onyxis

III. MALASSEZIOSES

· Quel est l’agent responsable du pityriasis versicolor ? comment fait on le diagnostic au laboratoire ?

Agent responsable : Malassezia sp

Diagnostic : l’examen direct est déterminant.

· Définition du pityriasis versicolor et nom scientifique de l’agent responsable :

C’est une épidermomycose fréquente, bénigne, cosmopolite, récidivante et non contagieuse, due à une invasion par Malassezia sp, des couches les plus externes de la peau.

IV. Aspergillus et aspergilloses :

· Qu’est ce qu’un aspergillome ? Citez un agent responsable et quels sont les facteurs favorisant ?

(1ere question de l’EMD2 2013 + réponse selon corrigé type)

Développement d’une masse de filaments aspergillaires dans une cavité bronchopulmonaire. Il y a les aspergillomes primaires qui se développent au niveau d’une bronche et les aspergillomes secondaires qui se forment au niveau d’une cavité préformé

Agent responsable : Aspergillus fumigatus

Facteurs favorisants :

- Caverne tuberculeuse

- Kystes hydatiques opérés au niveau du poumon ou rompus

- Abcès à pyrogènes

· Nom scientifique de 4 espèces aspergillaires en soulignant la plus fréquemment retrouvée en Algérie :

Aspergillus fumigatus

Aspergillus flavus

Aspergillus niger

Aspergillus nidulans

· Qu’est ce qu’une ontomycose ? Citez au moins deux agents responsables

C’est une prolifération de l’aspergillose superficielle provoquant une Surinfection des lésions préalables du conduit auditif externe → obstruction du conduit par amas de filaments / A.niger+++, A.flavus++

· Définition de l’aspergillose et agent responsable

Les Aspergilloses sont des mycoses cosmopolites provoquées par des champignons du genre Aspergillus.

· Citez 4 facteurs favorisant l’installation de l’aspergillose :

Pathologique : diabète

Médicamenteux : immunosuppresseurs, corticothérapie

Médico-chirurgicaux : chirurgie cardiaque, transplantation d’organes

V. Cryptococcose pneumocystose

· Une mycose à tropisme neuro-méningé : agent causal, identification au laboratoire et traitement

ü Agent causal : Cryptococcus neoformans

ü Identification au laboratoire : Repose essentiellement sur des méthodes mycologiques :

Prélèvement : en fonction de la clinique : LCR, LBA, Urine (systématiquement), Expectoration, croutes des lésions cutanées, pus, biopsie, sang (hémoculture, recherche d’Ag)

Examen direct :

A l’ancre de Chine au M.Optique après centrifugation du prélèvement (on prend le culot) : La capsule apparait négative sur fond noir.

Culture (3-5 jours) : systématique pour l’identification du genre et de l’espèce :

Ø Ensemencée à 30°C - 37°C sur milieu Sabouraud en présence de chloramphénicol et en absence de l’actidione (cycloheximide).Colonies coulantes de couleur beige.

Ø Des m. sélectifs : à base de graines de Niger ou à base d’acide caféique : colonies brunes.

Ø Repiquer sur des milieux à base de maltose.

Diagnostic indirect :

*Recherche des Ag circulaires capsulaires au niveau des surnageant des 4 prélèvements : sérum, urine, LBA, LCR, par différentes techniques : test d’agglutination avec AC mono/polyclonaux, test par immunochromatographie

ü Traitement :

3 Molécules à très bonne diffusion méningée : Amphotericine B, 5-Fluorocytosine, fluconasole.

· Cryptococcose : aspect pathologique, habitat, mode de contamination et mode de dissémination :

Aspect pathologique : levure ovoïde ou sphérique et encapsulée

Mode de contamination : voie respiratoire

Mode de dissémination : voie sanguine et lymphatique

· Donnez les principaux signes observés lors d’une cryptococcose primaire

Primo-infection : inapparente ou Pauci-symptomatique : toux, expectorations, fièvre, douleurs thoraciques et plus rarement : SDRA (syndrome de détresse respiratoire aigue).

Sur le plan radiologique : signes non spécifique (évoquant la tuberculose) : Pneumopathie interstitielles ou alvéolaire bilatérale+++, cavité, pleurésie…

La méningo- encéphalite disséminée (c’est a forme clinique la plus fréquente) : céphalées, fièvre, vertiges, troubles du caractère, trouble de la vision, des crises convulsives, hypertension intracrânienne, fond d’œil : œdème capillaire. Scanner, IRM : montrent des abcès intracérébraux. Cette méningo-encéphalite est responsable de mortalité dans les deux premières semaines(en cas d’absence du traitement)

· Citez un champignon incriminé dans la pneumonie interstitielle diffuse et son cycle évolutif, les facteurs favorisants et le mode de contamination

Pneupocystis jirovecii

ü Cycle : Le P. jirovecii se développe dans les alvéolaires pulmonaires, ne pénètre pas le pneumocyte : il est extra cellulaire.

Spores haploides -> fécondation/conjugaison -> zygote à noyau diploide -> forme intermédiaire = sporocyste à noyaux haploides -> mitose -> prékyste = présporocyste -> maturation -> kyste mur = sporocyste à 8 noyaux haploides -> déhiscence -> libération de spores haploides

ü Facteurs favorisants :

Immunodépression (LT CD4⁺ bas), cancers, hémopathies, greffes de M.O ou Organe solide, traitements : immunosuppresseurs, corticoïdes à long termes, Prématurées, nourrissons dénutris.

ü Mode de contamination : respiratoire

· Pneumocystose : définition, mode de contamination, formes retrouvées et traitement

ü La pneumocystose est une infection pulmonaire opportuniste cosmopolite dues à un microorganisme : Pneumocystis jirovecii classé dans le règne des fungis.

ü Mode de contamination : respiratoire

ü Formes retrouvées : kyste, spore (f. végétative), sporocyste.

ü Traitement :

- Cotrimoxazole : Bactrim

- Forme sévère : pentamidine

VI. Dermatophytes :

· Définir et citez les principales teignes rencontrées chez l’homme. Donnez le nom scientifique de 2 agents responsables pour chacune d’elle et le mode de contamination.

v Différentes teignes :

ü Teignes du cuir chevelu :

- Teignes microsporiques : Microsporum canis

- Teignes trichophytiques : Trichophyton violaceum

ü Teignes de la peau glabre : Trichophyton rubrum

- Dermatophyties circinées (Herpes circiné) : Microsporum canis

- Intertrigos : des grand plis (eczéma marginé de Hebra) et des petits plis (Athlet’s foot)

ü Onychomycoses (onyxis) : Trichophyton rubrum

v Mode de contamination :

- Parasites humains exclusifs : contamination direct ou indirect (sols souillés par les squames

- Dermatophytes transmis par les animaux accidentellement : contact avec l’animal

- Dermatophytes géophiles : contact avec le sol

· Définir « athlet’s foot », deux agents causal, facteurs favorisants :

C’est l’intertrigo des petits plis qui est une fissuration du plis accompagnée d’une hyper kératose d’aspect blanc nacré. Il débute dans le dernier espace inter orteils.

Agents responsables : Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes

Facteurs favorisants : la transpiration, les chaussures fermées, sport…

· Dermatophytes : définition, classification sommaire, exemples

Ce sont des champignons microscopiques qui provoquent des affections appelées « dermatophytoses ». Ils ont une affinité pour la kératine de la peau et des phanères. Ils provoquent des mycoses superficielles le plus souvent.

v Classification sommaire :

Règne : Fungi

Classe : Ascomycetes

Ordre : Onygenales

Famille : Arthrodermataceae

3 genres : Microsporum – Trichophyton – Epidermophyton

v Exemples : Trichophyton violaceum, Microsporium canis

· Qu’est ce que le favus ? Donnez le nom scientifique de l’agent responsable. Quel est le mode de contamination ? Pourquoi cette affection est elle grave ? Et comment la traite-t-on ?

- C’est une atteinte des cheveux à la base caractérisé par la formation de godets faviques.

- Agent responsable : T. schoenleinii

- Mode de contamination : parasites humains exclusifs -> contamination direct ou indirect (sols souillés par les squames)

- Cette affection est grave car : l’évolution de la teigne se fair vers l’alopécie cicatricielle définitive. Il n’y a pas de guérison à la puberté.

· En face de chacune des affections suivantes, mettez le nom scientifique de l’agent correspondant :

- Le pied d’athlète -> Trichophyton rubrum

- Perionyxis -> Candida albicans

- Herpes circiné -> Microsporum canis

- Eczema maligne de Hebra -> Trichophyton rubrum

· Citez les différentes teignes du cuir chevelu

- Teignes microsporiques

- Teignes trichophytiques

- Teignes suppurées

- Teignes faviques

· Donnez le nom scientifique de 2 dermatophytes anthropophiles de genre différent

- Trichophyton violaceum

- Epidermophyton floccosum

· Qu’est ce qu’une onychomychose ? Quels sont les champignons les plus impliqués dans cette pathologie ?

C’est une atteinte des pieds ou des mains qui débute habituellement par le bord de l’ongle puis s’étend. Les onyxis dermatophytiques ne présentent pas de peri onyxis.

Champignons les plus impliqués : Candida albicans, Trichophyton rubrum

· Donnez le nom scientifique de 2 champignons responsables de teignes microsporiques

Microsporum canis, Microsporum audouinii

· Citez un dermatophyte dont la transmission peut se faire par contact direct

Trichophyton violaceum

VII. Sporotrichose et Mycétomes

· Définition de la sporotrichose, agent causal et mode de contamination

v C’est une mycose cutanéo-lymphatique subaiguë ou chronique due à l’inoculation et le développement dans la peau et les tissus sous cutanés d’un champignon dimorphique

v Agent causal : Sporothrix schenckii

v Mode de contamination :

- Cutanée suite à un traumatisme par les épines des végétaux, les échardes de bois, les griffes de chats ou de chiens et les morsures de serpent

- Pulmonaire par voie aérienne suite à l’inhalation massive des conidies (spores)

· Les différentes formes de mycétomes : définition, agent causal et traitement

v Formes :

- Mycétomes fongiques = eumycétomes : champignons filamenteux qui sont des microorganismes eucaryotes.

Agent causal : Madurella mycetomatis

- Mycétomes actinomycosiques = actinomycétomes : bactéries filamenteuses aérobies qui sont des mircoorganismes procaryotes appartenant à l’ordre des Actinomycetales

Agent causal : Actinomadura madurae

v Traitement :

- Actinomycétomes : traitement médical (Bactrim…)

- Eumycétomes : traitement chirurgical

· Qu’est ce que le pied de Madura ? Citez 2 agents responsables. Quel est le traitement préconisé ?

Affection causé par des champignons ou bactéries filamenteuses introduits suite à un traumatisme, de localisation podale élective (= pied de madura)

Agents responsables : Madurella mycetomatis, Leptosphaeria senegalensis

Traitement : pour les mycétomes fongiques le traitement est chirurgical par l‘exérèse complète.

· Citez 2 champignons dont la transmission peut se faire à la suite de piqure d’épine

- Sporothrix schenckii

- Madurella mycetomatis

VIII. Parasitoses et mycoses opportunistes sur SIDA

· Donnez le nom scientifique de 4 parasites responsables de diarrhée chez l’immunodéprimé :

- Blastocystis hominis

- Cryptosporidium parvum

- Microsporidie

· Quelle est la principale complication de la toxoplasmose lors du sida

v SNC :

- Encéphalite (+eurs kystes) => évolution vers le coma

- Tableau pseudo-tumoral (1seul kyste)

v Poumon: 4-5 % sujets VIH, s’insère dans un tableau d’une toxo disséminée.

∞

Œil : choriorétinite => primo infection à location oculaire.

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